人工制备抗体制备方法有哪些？

抗体在疾病的诊断和免疫防治中的重要作用，使人们对抗体的需求越来越大。人工制备抗体是大量获得抗体的重要途径。早年人工制备抗体的方法主要是以相应抗原免疫动物，获得抗血清。由于抗原常常含有多种不同的抗原表位，加之所获得的抗血清也未经免疫纯化，因此，获得的抗血清实际上是含多种抗体的混合物，即多克隆抗体(polyclonal antibody)。用于制备抗血清的动物也因抗体需求量的增加而从小鼠、大鼠、兔、羊到马等大动物。

为了获得大量的、高特异性、均质的抗体，1975年，Kohler和Milstein建立了体外细胞融合技术，获得了免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，大规模地制备出高特异性的单克隆抗体(monoclonal antibody，简称单抗)。此后，单抗在理论和实践上的应用，成了解决生物学、医学等诸多重大问题的重要手段。然而其中仍有问题有待解决，例如在体内应用时，作为异源蛋白的单抗会引起人抗小鼠抗体反应(human anti-mouse antibody response，HAMA)。随着DNA操作和基因工程技术的发展，使得人们已有可能对抗体基因进行拆装和改建，发展出种种适合不同需求的基因工程抗体及其改型抗体(reshapedantibody)。

人工制备抗体是获得大量抗体的重要途径。制备方法有按常规动物免疫方法获得的多克隆抗体，用杂交瘤技术制备的单克隆抗体和近年来发展的基因工程抗体法。

一、多克隆抗体

多克隆抗体是由含多种抗原表位的抗原物质，刺激、活化多个B细胞克隆所产生的针对多种不同抗原表位的抗体混合物。在体内，多克隆抗体是机体发挥特异性体液免疫效应的重要分子，在中和抗原、免疫调理、介导CDC、ADCC中起重要作用。在体外，多克隆抗体主要来源于动物免疫血清、恢复期患者血清或免疫接种人群。其特点是来源广泛、制备容易。但由于多克隆抗体是多种不同抗原表位特异性抗体的混合，因此，它不能针对某一特定表位，特异性不高，常出现交叉反应；同时也不易大量制备，其应用受到限制。

二、单克隆抗体

制备特异性抗体的理想方法是获得只针对单一表位的B细胞克隆，并在体外扩增，使其分泌抗体。然而，浆细胞在体外的寿命较短，也很难培养。杂交瘤细胞和单抗技术克服了这一缺点。单抗在结构和组成上高度均一，抗原特异性及同种型一致，易于体外大量制备和纯化，因此，单抗具有纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应，制备成本低等特性，已广泛应用于疾病的诊断、特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、疾病的被动免疫治疗和生物导向药物的制备等。

三、基因工程抗体技术

随着DNA重组技术的发展，人们开始用基因工程的方法制备部分或全人源化的基因工程抗体（Genetic engineering antibody），如人-鼠嵌合抗体、改型抗体、双特异性抗体、小分子抗体等。基因工程的研制和发展，为新一代抗体的制备和应用展示了广阔前景。

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